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从石蜡包埋组织中获取高质量基因组DNA
1.组织切片(10μm)2~4张,装入1.5mL的灭菌Ep管中;
2.加入1mL二甲苯,充分混匀10s,全速离心14,000r/min 2min,弃上清,重复一次;
3.加入1mL无水乙醇,充分混匀,离心14000r/min 2min,弃上清,打开Ep管,室温孵育10min以上,直到残余的乙醇全部挥发;
4.加入180μL Buffer ATL和20μL Proteinase K,充分混匀,56℃水浴过夜;
5.次日90℃下孵育1h,短暂离心1.5mLEp管,迅速加入200μL Buffer AL和200μL无水乙醇,充分混匀,短暂离心;
6.小心转移全部消化物至QIAamp层析柱(放在2mL收集管)中,盖上盖子,4℃离心8000r/min 3min;
7.将柱子放入1个干净的收集管中,弃去原先的收集管,小心打开柱子,加入500μL Buffer AW1,盖上盖子,4℃离心8000r/min 3min;
8.将柱子放入1个干净的收集管中,弃去原先的收集管,小心打开柱子,加入500μL Buffer AW2,盖上盖子,4℃离心8000r/min 3min;
9.将柱子放入1个干净的收集管中,弃去原先的收集管,4℃全速离心14000r/min 3min,使膜完全干燥;
10.将柱子放入1个1.5mL干净的Ep管中,弃去原先的收集管。小心打开柱子,加入50μL Buffer ATE (ddH2O),室温下盖上盖子孵育5min,4℃全速离心14000r/min 1min,离心所得产物-20℃冻存备用。
注:
A. Buffer AL和Buffer ATL在使用前要70℃温育;
B. Buffer AW1和Buffer AW2在使用前要分别加入25ml和30ml的乙醇。

 

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