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脱落细胞石蜡块的制作
 
 
        脱落细胞是指自然管腔器官内表面粘膜正常情况下,人体各种粘膜上皮细胞经常有脱落更新,有病变的粘膜上皮细胞。它包括:宫颈、阴道、呼吸系统、浆膜腔积液、脑脊液、尿液等来源的细胞。细胞块技术是将上述来源的样品离心,细胞和微小组织块被高度浓缩后用固定剂凝聚、石蜡包埋,再制成切片。主要是用于免疫组化和分子病理检测,对于组织类型的区别有一定的帮助,特别是穿刺细胞学,是细胞学发展的方向。
 
一、宫颈脱落细胞石蜡块的制作
 1. 以阳性细胞将LCT保存液瓶中剩余的液体(肉眼观察可见的漂浮组织碎片)脱落细胞收集在锥形离心管内以2500rpm,/min离心10分钟,弃去上层液体;
 2. 加入适量的10%中性福尔马林,摇匀后将离心管斜放于4℃冰箱内,使细胞能与固定液充分接触,固定30-60min后,用2500rpm/min速度离心5min,弃上清,可见成团的细胞沉渣;
 3. 取出沉渣用纱布或包埋纸包好,随常规活检标本脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、切片。
注:如步骤2离心弃上清后细胞较少,则在沉渣中加入0.1%的蛋清,轻轻搅拌均匀,加适量福尔马林再次离心,取出沉渣后同步骤3。
 
二、浆膜腔积液石蜡块的制作
 1.       样本的来源:胸腔、腹腔、心包腔、盆腔的积液以及腹腔手术中的冲洗液。血性标本需抗凝。样本量最好在40-100ml以上,新鲜标本应立即送检,延迟送检的样本应放入冰箱内4℃冷藏;
 2.       积液样本静置后,取底部样本20ml,2000rpm/min离心5-10分钟,用吸管吸干上清液;
 3.       若为血性样本,应加入冰醋酸乙醇5ml(25%乙醇:冰醋酸=19:1)振荡,再离心沉淀。用吸管吸干上清液;
 4.       加入10%中性缓冲福尔马林液5ml,混匀(如果沉淀量极少,应放入1ml的尖头离心管内);
 5.       2000rpm/min离心5分钟;
 6.       吸干上清液,沿管壁轻轻加入95%乙醇5ml,静置1-2小时;
 7.       同5离心;
 8.       用尖头的硬签轻轻将沉淀物挑出(若沉淀物白色则染伊红上色),用包埋纸包好后,放入脱水盒。10%中性福尔马林固定2小时。随常规活检标本脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、切片。
 
三、脑脊液细胞块的制作
 1.       积液样本静置后,取底部样本20ml,2000rpm/min离心5-10分钟,用吸管吸干上清液;
 2.       加入10%中性缓冲福尔马林液5ml,混匀(如果沉淀量极少,应放入1ml的尖头离心管内);
 3.       2000rpm/min离心5分钟;
 4.       吸干上清液,沿管壁轻轻加入95%乙醇5ml,静置1-2小时;
 5.       同3离心;
 6.       用尖头的硬签轻轻将沉淀物挑出(若沉淀物白色则染伊红上色),用包埋纸包好后,放入脱水盒。10%中性福尔马林固定2小时。随常规活检标本脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、切片。
 
四、尿液细胞块的制作
 1.       积液样本静置后,取底部样本20ml,2000rpm/min离心5-10分钟,用吸管吸干上清液。
 2.       加入10%中性缓冲福尔马林液5ml,混匀(如果沉淀量极少,应放入1ml的尖头离心管内)。
 3.       2000rpm/min离心5分钟。
 4.       吸干上清液,沿管壁轻轻加入95%乙醇5ml,静置1-2小时。
 5.       同3离心。
 6.       用尖头的硬签轻轻将沉淀物挑出(若沉淀物白色则染伊红上色),用包埋纸包好后,放入脱水盒。10%中性福尔马林固定2小时。随常规活检标本脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、切片。
 
五、痰液、纤支镜冲洗液和肺泡灌洗液细胞块的制作
 1. 痰样本、纤支镜冲洗液和肺泡灌洗液加入30%乙醇15ml,振荡混合,充分打碎粘液。
 2. 2000rpm/min离心5分钟,用吸管吸干上清液。
 3. 加入10%中性缓冲福尔马林液5ml,混匀(如果沉淀量极少,应放入1ml的尖头离心管内)。
 4. 2000rpm/min离心5分钟。
 5. 吸干上清液,沿管壁轻轻加入95%乙醇5ml,静置1-2小时。
 6. 同4离心。
 7. 用尖头的硬签轻轻将沉淀物挑出(若沉淀物白色则染伊红上色),用包埋纸包好后,放入脱水盒。10%中性福尔马林固定2小时。随常规活检标本脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、切片。

参考文献
[1]蒋燕. MIF在TCT宫颈脱落细胞中的表达及意义. 山西医科大学硕士专业学位论文.4.
[2]曹跃华,杨敏等. 细胞病理学诊断图谱及实验技术. 北京科学技术出版社. 2009:410.
[3]曹跃华,杨敏等. 细胞病理学诊断图谱及实验技术. 北京科学技术出版社. 2009:405.
[4]曹跃华,杨敏等. 细胞病理学诊断图谱及实验技术. 北京科学技术出版社. 2009:P406.
[5] 曹跃华,杨敏等. 细胞病理学诊断图谱及实验技术. 北京科学技术出版社. 2009:400.
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